細說綿羊ELISA試劑盒的標本要求和操作步驟

　　綿羊ELISA試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法。用抗綿羊IgG1抗體包被于酶標板上，實驗時樣品或標準品中的綿羊IgG1與包被抗體結合，游離的成分被洗去。依次加入生物素化的抗綿羊IgG1抗體和辣根過氧化物酶標記的親和素?？咕d羊IgG1抗體與結合在包被抗體上的綿羊IgG1結合、生物素與親和素特異性結合而形成免疫復合物，游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB)，TMB在辣根過氧化物酶的催化下呈現藍色，加終止液后變成黃色。用酶標儀在450nm波長處測OD值，綿羊IgG1濃度與OD450值之間呈正比，通過繪制標準曲線計算出樣品中綿羊IgG1的濃度。

 

　　綿羊ELISA試劑盒的標本要求：

　　1、標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融

　　2、不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

 

　　操作步驟：

　　1、在各孔中加入標準品或樣品各100μL，37℃孵育90分鐘；

　　2、加入100μL生物素化抗體工作液，37℃孵育60分鐘；

　　3、洗滌3次；

　　4、加入100μL酶結合物工作液，37℃孵育30分鐘；

　　5、洗滌5次；

　　6、加入90μL底物溶液，37℃孵育15分鐘左右；

　　7、加入50μL終止液，立即在450nm波長處測量OD值；

　　8、結果計算。