兔ELISA試劑盒的關鍵技術參數包括板內差異、板間差異、批間差異、重復性、特異性、散布反應、回收率等。如果經常進行ELISA檢測,建議使用同一個試劑盒。制造商,以盡可能保證數據的可重復性(當然,條件是測試條件的一致性)。至于用于科研的ELISA試劑盒,不同廠家使用的抗體對、酶和底物、生產技術和開發實力不同,不同廠家的試劑盒測得的數據也會不同。
基本原理:
1、抗原或抗體能吸附到固相載體表面,并保持其免疫學活性;
2、抗原或抗體可通過共價鍵與酶連接形成酶結合物,仍保持其免疫學和酶學活性;
3、酶結合物與相應抗原或抗體結合后,可根據加入底物的顏色反應來判定是否有免疫反應的存在,而且顏色反應的深淺是與標本中相應抗原或抗體的量成正比例,因此,可以按底物顯色的程度顯示試驗結果。
兔ELISA試劑盒液體類標本: 包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清等。
1、血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
2、血漿:應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
3、尿液:用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
4、細胞培養上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/ 分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并 放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
5、組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。